本发明公开一种表面带氨基、羧基和羟基多官能团的自发荧光的聚合物微球的制备。本发明方法以生物小分子酪氨酸为原料,形成油包水的均一乳液,然后升温乳液缩聚形成初始微球,后经戊二醛固化,脱水得到呈现良好单分散性、自发荧光的酪氨酸缩甲醛微球。本发明采用的荧光原料酪氨酸为人体组成蛋白质的重要成分,制备的酪氨酸缩甲醛微球不仅具有良好的生物相容性,而且表面带有大量的氨基、羧基和羟基多官能,为微球的生物反应提供位点,有利于其在示踪、药物载体等生物医药领域的应用。本发明所述方法绿色环保、工艺简单、反应过程易于控制,生产成本低,重现性好,易推广使用。